Четверг, 27.07.2017, 17:12
КАФЕДРА ОБЩЕЙ ГИГИЕНЫ
КУРСКОГО ГОСУДАРСТВЕННОГО МЕДИЦИНСКОГО УНИВЕРСИТЕТА
Всё в руках человека!.. Поэтому мойте их чаще. Станислав Ежи Лец
Главная Мой профильРегистрация ВыходВход
Вы вошли как Гость · Группа "Гости"Приветствую Вас, Гость · RSS
Меню сайта
Категории раздела
Принятые к публикации материалы [70]
Конференции
III Всероссийская дистанционноая интернет- конференция с международным участием «Окружающая среда и здоровье населения»

АРХИВ КОНФЕРЕНЦИЙ
Рекламный блок
Статистика

Онлайн всего: 1
Гостей: 1
Пользователей: 0
Форма входа
Найти на сайте
 Информация
Главная » Статьи » Конференция "СПЭиГОС" 1 » Принятые к публикации материалы

Шевцова Ю.А., Сопина В.А., Локтева И.В.
САНИТАРНО-ГИГИЕНИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ 
СТОЧНЫХ ВОД НА ВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ

Шевцова Ю.А., Сопина В.А., Локтева И.В.

Федеральное бюджетное учреждение здравоохранения
«Центр гигиены и эпидемиологии в Курской области», г. Курск


Основным резервуаром кишечных вирусов во внешней среде являются фекалии и загрязненные ими хозяйственно-бытовые сточные воды. Контаминация стоков вирусами кишечной группы, в первую очередь энтеровирусами, способствует дальнейшему загрязнению воды открытых водоемов и источников водоснабжения. Кроме этого, энтеровирусы отличаются высокой устойчивостью к различным химическим, физическим и биологическим факторам, что обуславливает их длительную выживаемость в объектах окружающей среды. Кроме энтеровирусов, в сточных водах могут обнаруживаться вирусы гепатита А, а также адено -, рота-, норо-, астро- и реовирусы. Так как после обработки сточные воды сбрасываются в водоемы, оценка эффективности очистки играет существенную роль  в препятствии распространению кишечных инфекций, в первую очередь энтеровирусной этиологии, особенно полиомиелита, и поддержанию Российской Федерации как территории, свободной от полиомиелита. Многолетнее изучение вспышек энтеровирусной инфекции неопровержимо доказало водный путь передачи. А так как сточные воды являются основным резервуаром энтеровирусов, мониторинг зараженности является одной из первостепенных задач вирусологических лабораторий. 
Первые исследования сточных вод проводились с использованием обезьян, которым внутрибрюшинно вводили до 200 мл образцов. Однако таким методом энтеровирус обнаруживался в единичных случаях из-за несовершенства методики. Существенным прорывом явилось применение методов концентрирования первичных проб и использование не только восприимчивых животных, но и клеточных культур. Обнаружение энтеровирусов сразу увеличивалось в разы. С усовершенствованием методик удалось не только выделить энтеровирусы, в частности вирусы полиомиелита, но и определить группы ЕСНО, а также Коксаки А и В. 
В современной практике уделяется большое внимание слежению за вирусологической безопасностью сточных вод. В вирусологической лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Курской области» ведется постоянный мониторинг обнаружения полио- и неполиоэнтеровирусов. Отбор проб осуществляется в еженедельном режиме и проводиться круглогодично. Применяются современные методы концентрирования и дальнейшего исследования. В лаборатории широко распространен метод полимеразной цепной реакции с последующем генотипированием, а также классические вирусологические методики, такие как исследование на культуре клеток и реакция микронейтрализации. 
Концентрирование вирусов в вирусологической лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Курской области» проводиться с помощью флизелиновых пакетов с микропористым стеклом. Пакеты закрепляются в токе воды и оставляются на 3-7 дней. В дальнейшем проводиться элюция адсорбированных вирусных агентов.  Первым этапом в обнаружении энтеровирусов является постановка полимеразной цепной реакции со стадией обратной транскрипции (ОТ-ПЦР). Применение ОТ-ПЦР позволяет сымитировать естественную репликацию молекулу нуклеиновой кислоты invitro и обнаружить искомую ДНК в присутствии большого количества других молекул. Это достигается применением специфических праймеров (искусственно синтезированных участков ДНК). При этом мы можем получить невероятно большое количество специфических ДНК, так как при постановке ПЦР происходит экспоненциальное увеличение копий фрагментов исходной молекулы. Полимеразная цепная реакция возможна только для ДНК, поэтому содержащуюся в энтеровирусах РНК переводят в комплементарную ДНК на этапе обратной транскрипции. Полученная кДНК является мишенью для дальнейшей ПЦР.  При условии наличия в концентратах образцов сточных вод энтеровирусов, запускается механизм репликации специфических фрагментов и с помощью флуоресцентных зондов происходит визуализация результата полимеразной цепной реакции. Положительные образцы направляются для генотипирования, которое позволяет отдифференцировать вакцинные штаммы Sabin1,2,3 и энтеровирусы группы С. Кроме этого, проводится дальнейшее вирусологическое исследование положительных образцов, которое представляет собой накопление энтеровирусов на культуре клеток. Первичным этапом этого метода является получение монослоя необходимой культуры во флаконе или пробирке. В дальнейшем проводиться заражение путем добавления 0,5 мл обработанной пробы, с последующей инкубацией при 36°С. Появление цитопатического эффекта (ЦПЭ) говорит о том, что произошло проникновение вируса в клетки с его накоплением. Для дальнейшего накопления проводиться один или несколько пассажей. Следующий этап вирусологического исследования заключается в постановке реакции микронейтрализации для идентификации выделенных цитопатических агентов. Иммунная сыворотка, предотвращающая развитие ЦПЭ, указывает на тип присутствующего вируса. В вирусологической лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Курской области» для санитарно-вирусологических исследований применяют следующие культуры клеток:RD, Hep-2, L20B. Культура клеток RD происходит из человеческой рабдомиосаркомы и обладает чувствительностью к вирусам полиомиелита, некоторым вирусам Коксаки А и широкому спектру вирусов ECHO. Hep-2 получают из эпидермоидной карциномы человека. На ней хорошо размножаются вирусы Коксаки В и полиомиелита. Невероятно ценной является культура клеток L20B, так как она избирательно чувствительна к вирусам полиомиелита. Ее создают на основе мышиной линии L-клеток, в которую экспрессированы человеческие рецепторы к полиовирусу. L20B используют для разделения смеси вирусов и селективного выделения исключительно полиовирусов. Пробы, в которых наблюдается ЦПЭ на любой из перечисленных культурах клеток, исследуются в реакции микронейтрализации. На данном этапе очень важным фактором является использование именно той культуры, на которой ранее произошло накопление вирусного агента. По отсутствию ЦПЭ с одной или нескольких иммунных сыворотках делается вывод о присутствующих в образце пробы сточных вод энтеровирусах. Кроме этого, возможно исследование зараженной культуры клеток (культуральная жидкость или лизат клеток) методом ОТ-ПЦР. В отличие от концентратов проб сточных вод, исследование культуры клеток позволяет обнаружить репликативную «минус» нить РНК энтеровирусов, что является косвенным подтверждением инфекционности выделенных микроорганизмов. 
Результаты мониторинга сточных вод на энтеровирусы, проводимого вирусологической лабораторией ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Курской области», существенно изменились с момента внедрения молекулярных методов (ОТ-ПЦР). За последние три года возросло в разы количество положительных находок, выявляемых на этапе ОТ-ПЦР. Так, в 2009 году из 128 проб, поступивших на вирусологическое исследование, к 48 пробам применялся молекулярный метод. В результате, было обнаружено 10 образцов, содержащих РНК энтеровирусов, из которых 3 подтвердились вирусологически. В 2010 году было уже исследовано 117 из 134 проб методом ОТ-ПЦР, количество положительных находок составило 43, из них 2 дали положительный результат на культуре клеток. Кроме того,  с 2010 года проводится генотипирование образцов, в результате были идентифицированы 3 энтеровируса группы С и 1 вакцинный вирус полиомиелита Sabin2. В 2011 году все 190 проб были исследования методом ОТ-ПЦР, из них 28 оказались положительными и были направлены на дальнейшее вирусологическое  изучение и генотипирование. В одной пробе наблюдался ЦПЭ и в пяти при генотипировании определились энтеровирусы группы С. Полученные результаты укладываются в понятие нормы и позволяют сделать вывод, что сточные воды не представляют опасности в плане распространения энтеровирусной инфекции и полиомиелита, а также свидетельствуют о том, что Российская Федерация является территорией, свободной от полиомиелита.
Категория: Принятые к публикации материалы | Добавил: RooT (03.02.2012)
Просмотров: 787 | Рейтинг: 0.0/0
Всего комментариев: 0
Добавлять комментарии могут только зарегистрированные пользователи.
[ Регистрация | Вход ]
Copyright ksmumpf group © 2017
Choose language
Английский Белорусский Немецкий
Облако
Войти в почту
Логин:
Пароль:

Соц. закладки